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          新聞動態
          丙烯酰胺凝膠電泳概述
          發布于:2011-01-27 0:25:47 點擊次數:5497次  

          丙烯酰胺凝膠電泳即聚丙烯酰胺凝膠電泳

             聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide,簡稱Acr)和N-甲叉雙丙烯酰胺(N,N—methylene-bisacylamide,簡稱Bis)在加速劑N,N,N,N—四甲基乙二胺(N,N,N,N—tetramethyl ethylenedia mine,簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(ammonium persulfate (NH4)2S2O8,簡稱AP)或核黃素(ribofavin即vita min B2,C17H20O6N4)的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱PAGE)。
              聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的電泳方法。在這種支持介質上可根據被分離物質分子大小和分子電荷多少來分離。
              聚丙烯酰胺凝膠有下列特性:
          (1)在一定濃度時,凝膠透明,有彈性,機械性能好;
          (2)化學性能穩定,與被分離物不起化學反應,在很多溶劑中不溶;
          (3)對pH和溫度變化較穩定;
          (4)幾乎無吸附和電滲作用,只要Acr純度高,操作條件一致,則樣品分離重復性好;
          (5)樣品不易擴散,且用量少,其靈敏度可達10-6g
          (6)凝膠孔徑可調節,根據被分離物的分子量選擇合適的濃度,通過改變單體及交聯劑的濃度調節凝膠的孔徑;
          (7)分辨率高,尤其在不連續凝膠電泳中,集濃縮、分子篩和電荷效應為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。
             
            
          聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為連續的和不連續的兩類,前者指整個電泳系統中所用緩沖液,pH值和凝膠網孔都
          是相同的,后者是指在電泳系統中采用了兩種或兩種以上的緩沖液,pH值和孔徑,不連續電泳能使稀的樣品
          在電泳過程中濃縮成層,從而提高分辨能力。


          蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。如
          果加入一種試劑使電荷因素消除,那電泳遷移率就取決于分子的大小,就可以用電泳技術測定蛋白質的
          分子量。1967年,Shapiro等發現陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉(SDS)具有這種作用。當向蛋白質溶
          液中加入足夠量SDS和巰基乙醇,SDS可使蛋白質分子中的二硫鍵還原。由于十二烷基硫酸根帶負電,
          使各種蛋白質—SDS復合物都帶上相同密度的負電荷,它的量大大超過了蛋白質分子原的電荷量,
          因而掩蓋了不同種蛋白質間原有的電荷差別,SDS與蛋白質結合后,還可引起構象改變,蛋白質—SDS
          復合物形成近似“雪茄煙”形的長橢圓棒,不同蛋白質的SDS復合物的短軸長度都不一樣,約為18A,
          這樣的蛋白質—SDS復合物,在凝膠中的遷移率,不再受蛋白質原的電荷和形狀的影響,而取決于分子
          量的大小,因而SDS FONT FACE聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用于測定蛋白質的分子量。
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